第十八次免疫组化质控活动存在的问题分析

单位编号:4
得分:DOG1 11.5分
问题:信号弱、强阳性点数少、着色不均匀。
原因:可能与抗原修复及使用不同公司试剂有关。pH6.0修复液的修复能力较弱。一抗与二抗使用的是不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。另外,一抗的浓度、有效性(如使用、保存是否规范等可能造成抗体效力下降)也可能影响最终染色结果。你们其余三个抗体染色不错,因此,对抗体也要采取个体化对待,不一定同一种条件下每种抗体都能染出最佳效果。
建议:EDTA或EGTA pH8.0-9.0修复液;最好用同一家公司试剂,并摸索DOG1 的染色条件。

单位编号:11
得分:CDX2 5.5分
问题:未见阳性信号。
原因:从注册表看,一抗、二抗使用不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。一抗孵育时间(37℃,40min)、修复方式(高压锅、100℃、2min)需要适当调整;另外,一抗的浓度、有效性(如使用、保存是否规范等可能造成抗体效力下降)也可能影响最终染色结果。你们其余三个抗体染色不错,因此,对抗体也要采取个体化对待,不一定同一种条件下每种抗体都能染出最佳效果。
建议:高压锅、100℃喷气后2-3min;EDTA或EGTA pH8.0-9.0修复液;一抗孵育时间适当延长至60min,最好用同一家公司试剂,并摸索CDX2的染色条件。

单位编号:31
得分:CK20 4分
问题:检测试剂选择错误。
原因:本次检测试剂可能选择错误,从免疫组化染色结果判断均为淋巴细胞的着色,可能拿成CD20试剂了。
建议:重复CK20的染色,确定实验室检测条件是否存在问题。

单位编号:35
得分:CK20 无法评分
问题:提供的4张检测切片,其中CK20这张检测切片为当地检测单位自己提供的染色切片。
原因:未见测试的组织芯片切片,无法进行评分。
建议:所有检测的组织芯片均需寄回。

单位编号:47
得分:CDX2 5分
问题:未见阳性信号。
原因:从注册表看,一抗、二抗使用不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。一抗孵育时间(37℃,32min)偏短、SP方法的敏感性较弱。另外,你们其余三个抗体染色不错,因此,对抗体也要采取个体化对待,不一定同一种条件下每种抗体都能染出最佳效果,机器染色的条件可能没有调整到CDX2 抗体的最佳状态。
建议:一抗孵育时间适当延长至60min,最好用同一家公司试剂,并摸索CDX2的染色条件,将机器染色调试到理想状态;检测方法可以尝试使用EnVision等方法。

单位编号:48
得分:CD117 9分、CDX2 9分、DOG1 6分
问题:CD117和CDX2染色信号弱、强阳性点数少、着色不均匀、苏木素复染过深;DOG1染色未见阳性信号。
原因:观察检测的4种不同抗体的染色,大部分染色都不理想;从注册表看,其中部分一抗抗体生产日期较早,可能过了抗体有效期;抗原修复不充分也会影响染色效果(本次检测合格项目CK20采用的是酶消化的抗原修复方法),可能没有及时更换修复液。
建议:查看一抗有效期,如无问题,用自己实验室的结肠间质瘤病变组织再做测试,看看是否成功。更换修复液,用EDTA或EGTA pH8.0-9.0修复液,微波或煮沸20分钟修复,或高压喷气持续2分钟;苏木素染色后进行适当分化(过酸或水冲)。

单位编号:49
得分:CDX2 12分
问题:染色信号弱、苏木素复染过深。
原因:从注册表看,一抗、二抗使用不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。一抗孵育时间(室温,15min)时间偏短、二抗孵育时间(室温,8min)时间偏短。另外,你们其余三个抗体染色不错,因此,对抗体也要采取个体化对待,不一定同一种条件下每种抗体都能染出最佳效果,机器染色的条件可能没有调整到CDX2 抗体的最佳状态。
建议:一抗孵育时间适当延长至60min,二抗孵育时间延长至15-20min,最好用同一家公司试剂,并摸索CDX2的染色条件,将机器染色调试到理想状态。

单位编号:55
得分:CK20 5分
问题:飞片。
原因:4张检测切片,其他3张染色效果很理想,未见组织飞片,但CK20这张几乎未见检测组织。从注册表看,可能与人工染色过程中,操作不当所致;也不除外提供的检测切片质量问题。
建议:操作细心。

单位编号:56
得分:CD117 11.5分
问题:染色信号弱、苏木素复染过深。
原因:从注册表看,DAB显色条件及时间为25℃,1min,时间过短会影响显色;此外苏木素复染时间过长,影响染色信号判断。
建议:DAB显色应该在显微镜下调控,待显色信号充分时再中止显色;苏木素染色后进行适当分化(过酸或水冲)。

单位编号:59
得分:CD117 9.5分、 DOG1 9.5分
问题:均为染色信号弱、苏木素复染过深。
原因:从注册表提供信息分析,一抗均为浓缩液,可能与稀释浓度不合适有关;pH6.0修复液的修复能力较弱;一抗、二抗使用不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。此外苏木素复染时间过长,影响染色信号判断。
建议:浓缩液在不同实验室的不同实验条件下,稀释浓度会存在差异,建议选择阳性切片进行浓度梯度测试,找到最佳的稀释浓度;EDTA或EGTA pH8.0-9.0修复液;最好用同一家公司试剂;苏木素染色后进行适当分化(过酸或水冲)。

单位编号:67
得分:CD117 5分
问题:检测组织中2个点均飞片,残存的结肠组织内的肥大细胞均未见阳性信号。
原因:一抗、二抗使用不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。一抗孵育时间(37℃,32min)时间偏短、二抗孵育时间(37℃,8min)时间偏短。
建议:一抗孵育时间适当延长至60min,二抗孵育时间延长至15-20min,最好用同一家公司试剂,并摸索CD117 的染色条件,将机器染色调试到理想状态。

单位编号:91
得分:CD117 11.5分
问题:检测组织被划痕、掉片,影响判断。
原因:可能与手工染色过程中操作不当所致。
建议:操作冲洗过程中,水流不宜过急,擦拭切片时,看清楚组织,以免划痕。

单位编号:101
得分:CK20 无法评分
问题:检测组织中的肾组织内出现非特异性着色及过度阳性信号。
原因:可能加错抗体,根据阳性表达模式可能加成“广谱CK”。
建议:本次检测4个抗体,其中3个染色理想的抗体之修复方法均为热修复,CK20 的修复方法为胃酶消化方法,如有可能可以尝试使用热修复方法。

单位编号:104
得分:CD117 5分、CDX2 5分
问题:均未见阳性信号,肾组织内有非特异性着色。
原因:修复方法为水煮(EDTA pH8.0、98℃、20min)出现抗原修复不充分,另外2个检测抗体修复方法为酶消化和高压锅热修复,则染色效果尚可;检测方法为SP方法的敏感性较弱;二抗孵育时间(60℃,10min)温度偏高。
建议:用EDTA或EGTA pH8.0-9.0修复液,微波或煮沸20分钟修复,或高压喷气持续2分钟;二抗孵育温度室温即可;检测方法可以尝试使用EnVision等方法。

单位编号:112
得分:CD117 8分
问题:染色信号弱、背景深,染色不均,上皮出现非特异性着色。
原因:一抗孵育时间(37℃,45min)时间偏短;一抗、二抗使用不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。
建议:一抗孵育时间适当延长至60min;最好用同一家公司试剂。

单位编号:119
得分:CK20 5分
问题:未见阳性信号,肾组织有非特异性着色。
原因:观察检测的4种不同抗体的染色,其他抗体均为热修复(效果还算理想),CK20为酶消化(无信号),推测可能与抗原修复不足有关;非特异性着色可能与冲洗不充分有关。
建议:重新检测酶消化的修复方法是否有效,如有必要可尝试用EDTA或EGTA pH8.0-9.0修复液,微波或煮沸20分钟修复,或高压喷气持续2分钟;操作过程中,冲洗要充分。

单位编号:125
得分:CDX2 5分
问题:未见阳性信号。
原因:其他3个抗体染色均很理想,从注册表中没有发现染色方法和程序有何不妥。推测原因可能与1、一抗出问题;2、操作不当。
建议:用手工染色测试一抗是否有效;再次重复检测CDX2染色,避免操作过程中漏加抗体等意外情况出现。

单位编号:134
得分:CD117 11分
问题:信号弱,背景深,着色不均,有边缘效应。
原因:一抗孵育时间(120℃可能写错了,20min)时间偏短;此外还可能与抗体滴加的量不足等有关。
建议:一抗孵育时间延长(25℃-37℃,60min),滴加抗体前需要摇匀后充分覆盖于检测组织表面。

单位编号:137
得分:CD117 9.5分
问题:着色不均,检测组织中间可见阳性信号,但组织周边未见着色信号,背景深。
原因:注册填表中看,染色方法没有明显问题;推测可能与人工染色过程中组织用记号笔画圈过小、抗体冲洗不充分有关。
建议:记号笔画圈时需要略大于检测组织(油水效应会出现圈周边2mm的无抗体区域,应该避开), 滴加抗体前需要摇匀后充分覆盖于检测组织表面。

单位编号:139
得分:CDX2 无法评分
问题:一抗滴加错误;未见核着色信号。
原因:推测可能一抗加成Villin。
建议:滴加抗体前仔细观察试剂抗体的名称,避免操作失误。

单位编号:140
得分:CDX2 12分
问题:信号弱、有背景。
原因:从注册表提供信息分析,一抗均为浓缩液,可能与稀释浓度不合适有关;一抗孵育时间(100℃可能写错了,20min)短;一抗、二抗使用不同公司的试剂,可能会影响抗体之间的反应。
建议:浓缩液在不同实验室的不同实验条件下,稀释浓度会存在差异,建议选择阳性切片进行浓度梯度实验,找到最佳的稀释浓度;一抗孵育时间延长(37℃,60min);最好用同一家公司试剂;将机器染色调试到理想状态。

单位编号:141
得分:CDX2 8分
问题:信号弱,难以判断。
原因:注册填表中看,染色方法没有明显问题;不知是否与一抗有关。
建议:一抗克隆号没有问题,滴加抗体前需要摇匀后充分覆盖于检测组织表面;可以先用肠壁组织做对照进行测试,找到最佳的实验室染色条件。

单位编号:151
得分:CD117 无法评分
问题:组织飞片,难以判断。
原因:4张检测切片,其他3张染色效果尚可,未见组织飞片,但CD117这张几乎未见检测组织。从注册表看,可能与人工染色过程中,操作不当所致,也可能与提供切片质量有关。
建议:操作细心。

单位编号:159
得分:CD117 11分
问题:信号弱、背景深、苏木素分化不好。
原因:可能与抗原修复不足有关,pH6.0修复液的修复能力较弱。背景深与冲洗不充分有关。此外苏木素复染时间过长,影响染色信号判断。
建议:EDTA或EGTA pH8.0-9.0修复液;苏木素染色后进行适当分化(过酸或水冲)。

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