第十四次免疫组化质控活动存在的问题分析

单位编号:1
得分:P120(12.5分)
问题:染色过深,有背景,影响信号判读。
原因:可能是高压修复100℃,20分钟。
建议:可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟,如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:10
得分:E-cad(11分)
问题:染色太弱。可能影响正常判断。
原因:可能与DAB显色时间1min有关;实验室修复液为柠檬酸盐pH6.0液体可能会影响抗原修复。
建议:显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。
尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:13
得分:E-cad(9.5分)
问题:几乎没有信号。
原因:你们使用的一抗是否测试过,是否有效,因为所有参加单位中只有你们一家使用了这种克隆。另外,也可能与一抗与二抗使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想有关。
建议:用同一家公司的所有试剂。尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:17
得分:E-cad(12.5分)
问题:染色太弱。影响正常判断。
原因:可能与二抗孵育时间过短或一抗用量较少有关。
建议:二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:20
得分:E-cad(5.5分)
问题:几乎没有信号。
原因:可能与修复时间不足(高压锅1分钟时间太短),或一抗与二抗使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想有关。
建议:用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。用同一家公司的所有试剂。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:23
得分:ER(12分),E-cad(11.5分)
问题:ER只有一个这种点着色,其余点几乎未着色。E-cad胞浆着色了膜没有着色(只有肝脏的包膜着色了)。
原因:ER染色切片不理想可能与一抗的克隆号有关,你们用的是EP1,而很多单位使用的是SP1;也可能一抗与二抗使用不同公司试剂,两家试剂的配合上不理想有关;E-cad微波修复可能不充分(高火5min,低火5min)。
建议:用同一家公司的所有试剂。尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。

单位编号:24
得分:P120(11分)
问题:染色太弱。影响正常判断。
原因:可能与微波修复煮沸5min,中低火修复3-4min有关。
建议:使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:33
得分:PR(12.5分)
问题:染色分布不均,其中一块组织阳性信号太弱,几乎无法判读。
原因:可能与机器操作,染色过程不均匀有关,一抗37℃,48min太短,而且抗原修复95℃,30min可能会影响。
建议:如果使用机器染色时,应先进行调试。另外,一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟,如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。

单位编号:34
得分:PR(12.5分),E-cad(6分)
问题:染色太弱,苏木素复染背景过深,影响信号判读。
原因:可能与二抗孵育时间过短(10分钟),并在苏木素中复染时间过长或者未分化有关。
建议:二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。复染应缩短一半时间。

单位编号:35
得分:E-cad(11分)
问题:其中边缘有一块组织染色偏弱。
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。我们推测是否与染色过程中,组织干片有关。或许一抗的克隆号有关。
建议:染色过程在保证组织中水分甩干的同时,还要避免组织长时间处于干燥状态;每一步清洗均应进行三次,显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。也可试试别的一抗克隆号。

单位编号:37
得分:PR(12.5分)
问题:染色分布不均,其中一块组织阳性信号大弱,几乎无法判读。
原因:可能与机器操作,染色过程不均匀有关,一抗孵育时间(37℃,32min)太短,以及二抗孵育时间过短(8分钟)有关。
建议:如果使用机器染色时,应先进行调试。另外,一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。染色过程在保证组织中水分甩干的同时,还要避免组织长时间处于干燥状态。

单位编号:40
得分:ER(5分),E-cad(5.5)
问题:ER染色无信号;E-cad用于检测的组织染色几乎无信号,但周围组织(被检测单位添加的)组织染色成功较弱。
原因:ER染色可能与机器操作,染色过程不均匀有关,一抗孵育时间(37℃,32min)太短,以及二抗孵育时间过短(8分钟)有关。使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想。E-cad染色可能与机器操作,染色过程不均匀有关,使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想。
建议:如果使用机器染色时,应先进行调试。另外,一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。用同一家公司的所有试剂。

单位编号:41
得分:ER(8.5分),PR(10分),P120(11.5分),E-cad(11.5分)
问题:ER 、PR染色分布不均,其中一块组织阳性信号大弱,几乎无法判读;P120、 E-cad 染色信号较弱。
原因:可能与微波修复不足(95℃,18分钟),二抗孵育时间过短(15分钟)有关。
建议:尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟,如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。抗体在稀释过程中应该做好预实验,选择最佳浓度。

单位编号:43
得分:E-cad(11.5)
问题:染色偏弱,对比较差,复染深。
原因:高压修复应该控制好时间和温度;也可能与一抗克隆号有关;也存在苏木素复染时间过长。
建议:如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。复染应缩短一半时间。也可试试别的一抗克隆号。

单位编号:46
得分:E-cad(12分)
问题:检测组织周围染色信号强,但中央组织信号弱。
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。我们推测是否与染色过程中,组织干片或显色时间过短有关。
建议:染色过程在保证组织中水分甩干的同时,还要避免组织长时间处于干燥状态;每一步清洗均应进行三次,显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:57
得分:E-cad(9分)
问题:检测信号胞浆阳性,而无包膜阳性;并有2个组织无阳性信号表达。
原因:可能与修复不足(100度,1-1.5分钟),以及显色时间过短有关。
建议:如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:60
得分:ER(12.5分),P120(11.5分)
问题:ER染色信号不均,一侧强一侧弱;中间一块组织无表达。P120染色信号弱。
原因:可能与修复不足(1.5分钟)有关。
建议:尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。

单位编号:62
得分:ER(12.5分)
问题:中间一块组织信号太弱。
原因:100度10分钟的修复应该不够。如果你们加压了,喷汽了使120度,时间用10钟,就太长了。
建议:尝试采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。

单位编号:63
得分: E-cad(12分)
问题: 复染较深,并且是褒奖着色,包膜未着色(肝脏包膜有着色),组织有点飞片。
原因:高压修复时间长有关,在苏木素中复染时间过长。
建议:采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。复染应缩短一半时间。

单位编号:66
得分: ER(11.5分),P120(9.5分),E-cad(5分)
问题:ER信号较弱,中央组织几乎无信号;P120信号较弱,周边组织几乎无信号;E-cad几乎无信号。
原因:可能与二抗检测系统用Immuno-Bridge有关。
建议:采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。二抗检测系统使用EnVision等方法。

单位编号:67
得分: E-cad(9分)
问题: 有背景,血管内血清有着色。
原因:微波炉修复100℃,时间为9分钟,抗原修复的温度不充足,修复液为柠檬酸盐pH6.0,可能会降低信号强度;血管内血清有着色可能与H2O2长时间未更换,效果不理想有关。
建议:微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。H2O2应该定期更换。

单位编号:68
得分: E-cad(9分)
问题:信号较弱,周边组织几乎无信号。
原因:可能与一抗反应温度过低(-4℃)有关。
建议:一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时。二抗检测系统使用EnVision等方法。

单位编号:77
得分: P120(10.5分),E-cad(12分)
问题: P120信号太弱,影响判读。E-cad背景深,有非特异性着色。
原因:使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想。SP检测系统敏感性相对低。高压锅喷气5min,时间可能太长。
建议:使用同一公司所有试剂。二抗检测系统使用EnVision等方法。

单位编号:87
得分: E-cad(10.5分)
问题: 染色信号偏弱。
原因:高压锅100度5-10min,修复不够。也许与染色过程中,抗体浓度不足有关。
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。另外,抗体在滴加过程中,应该将切片上的水分甩干,以免稀释抗体浓度。

单位编号:91
得分:ER(12.5分),P120(10.5分),E-cad(11分)
问题:ER 周围组织信号尚可,中间一块组织信号太弱;P120染色信号弱,周围组织无信号。 E-cad周边组织染色信号偏弱;
原因:抗原修复的不足(100℃,2分钟)有关。
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:92
得分: P120(7.5分),E-cad(6.5分)
问题:染色弱,伴非特异性着色
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。染色弱可能与抗原修复不充分有关,非特异性着色可能与二抗孵育1小时有关。
建议:采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。二抗孵育时间适当缩短。

单位编号:94
得分:P120(5分),E-cad(5.5分)
问题:染色弱,影响信号判读。
原因:抗原修复方法没有提供;SP检测系统敏感性相对低。
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。二抗检测系统使用EnVision等方法。

单位编号:96
得分: E-cad(9.5分)
问题:染色不均,一侧对照组织信号强,一侧测试组织信号弱。
原因:可能与高压修复后,切片没有浸泡在修复液中自然冷却或切片在操作过程中没有放平有关。
建议:高压修复后,切片应该浸泡在修复液中自然冷却,切片在操作过程中应该放平。

单位编号:101
得分:PR(7分),P120(12分),E-cad(11分)
问题:PR几乎无信号,组织有轻度飞片;P120染色弱,影响信号判读,组织有轻度飞片;E-cad周边有一块组织信号弱,影响信号判读。
原因:微波炉修复95℃,时间为20分钟,抗原修复的温度不充足,修复液为柠檬酸盐pH6.0。一抗孵育时间(37℃,45min)太短。
建议:微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。操作过程中不要过度过强冲洗切片。一抗孵育时间(37℃,60min)。

单位编号:104
得分: PR(12.5分)
问题:周围组织信号尚可,中间一块组织无信号
原因:可能与机器操作,染色过程不均匀有关;而且一抗孵育时间(37℃,32min)太短。
建议:如果使用机器染色时,应先进行调试。一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。

单位编号:115
得分:ER(5分), E-cad(12分)
问题:ER信号特别弱;E-cad染色不均,一侧组织信号强,一侧组织信号弱,影响信号判读。
原因:使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想。修复液为柠檬酸盐pH6.0,会降低ER染色的信号强度;容易影响最终的显色强度。
建议:使用同一家公司试剂。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:120
得分: E-cad(12.5分)
问题:染色过强,有非特异性着色
原因:抗原修复的不足(100℃,2分钟)有关,显色时间10分钟,并用不同公司试剂
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复,使用同一家公司试剂。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:121
得分:ER(12.5分),PR(12.5分),E-cad(12.5分)
问题:ER和PR染色信号弱,信号强度不均,中间弱,周边强;E-cad有背景,非特异性着色。
原因:抗原修复的不足(100℃,2分钟)有关。
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:122
得分: PR(12.5分)
问题:周边组织信号强,中间组织几乎无信号
原因:抗原修复的不足(1.5分钟)有关。
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:124
得分:PR(12分)
问题:周边组织信号强,中间组织几乎无信号
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。我们推测是否与染色过程中,抗体浓度不足有关。
建议:使用稀释的抗体,需要预先测试,选择最佳稀释浓度;抗体在滴加过程中,应该将切片上的水分甩干,以免稀释抗体浓度。

单位编号:130
得分: E-cad(11.5分)
问题:染色偏弱
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。我们推测是否与染色过程中,抗体浓度不足有关。
建议:抗体在滴加过程中,应该将切片上的水分甩干,以免稀释抗体浓度。

单位编号:132
得分:PR(12.5分)
问题:周边组织信号强,中间组织几乎无信号,影响信号判读。
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。我们推测是否与染色过程中,抗体浓度不足有关。
建议:抗体在滴加过程中,应该将切片上的水分甩干,以免稀释抗体浓度。采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复;使用同一家公司试剂。

单位编号:137
得分:ER(9分),PR(12.5分),P120(10分),E-cad(8分)
问题:ER染色信号弱;PR周边组织信号强,中间组织几乎无信号,影响信号判读;P120染色弱,有背景;E-cad几乎无信号。
原因:抗原修复的不足(105℃,5分钟)有关。
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:138
得分:PR(12.5分)
问题:周边组织信号强,中间组织几乎无信号,影响信号判读。
原因:抗原修复的不足(100℃,1.5-2分钟)有关。
建议:高压修复,应在喷气后2-2.5分钟即中止修复。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

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