第十二次次免疫组织化学质量控制存在的问题、原因分析和建议

单位编号:1
得分:CD20(5分)、CK(5分)、Ki-67(5分)、
问题:无信号。组织形态难以辨认。
原因:染色过程中组织未按正常流程处理。
建议:1、严格按照免疫组化正常流程进行操作。2、如果使用机器染色时,应先进行调试。一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟,如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:18
得分:CD3(11分)
问题:染色太弱。可能影响正常判断。
原因:可能与二抗孵育时间过短或一抗用量较少有关。
建议:二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。严格控制高压修复时间,不宜过长,以免组织飞片。

单位编号:33
得分:CK(12分)
问题:染色较弱。
原因:可能与一抗孵育时间短(32分钟)有关,或一抗与二抗使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想有关。
建议:用同一家公司的所有试剂。使用机器染色时,应先进行调试。一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟,如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:39
得分:CD3(5分)、CK(12分)、Ki-67(5分)。
问题:CD3、Ki-67无信号,CK染色太弱。
原因:一抗与二抗使用不同公司试剂,可能在两家试剂的配合上不理想,以及显色时间过短、修复时间过长有关。
建议:用同一家公司的所有试剂;由于你们使用的是机器染色,应该与销售机器的商家联系,让他们将机器调试好了再使用。手工染色可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟,如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:45
得分:CD3(12分)、CD20(12分)
问题:染色较弱。
原因:可能与二抗孵育时间过短有关。
建议:二抗孵育温度37℃,时间延长为20-30分钟。严格控制高压修复时间,不宜过长,以免组织飞片。

单位编号:49
得分:CD3(5分)
问题:染色浅,有非特异性着色。
原因:从所有染色切片中,内源性生物素没有完全封闭。
建议:定期监测封闭液,并及时更换,采用高压修复时,应在喷气后2分钟即中止修复。或可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。

单位编号:57
得分:CD3(11分)
问题:复染过深,影响信号判断。
原因:可能与高压修复时间喷气后4分钟有关,并在苏木素中复染时间过长
建议:用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。或可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。复染应缩短一半时间。

单位编号:62
得分:CD3(11分)
问题:染色较弱,对比较差。
原因:可能与高压修复时间120℃,5分钟有关。
建议:用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。或可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:65
得分:CD20(9分)
问题:染色太弱。
原因:可能与高压修复时间140℃,1分钟有关。
建议:用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。或可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。

单位编号:70
得分:CD3(9分)、CD20(5分)、CK(7分)
问题:染色太弱。
原因:可能与二抗没有进行内源性生物素封闭,以及显色时间过短、温度过低有关。
建议:二抗孵育温度提高至37℃,时间为20-30分钟。室温,显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:78
得分:CD3(7分)、CD20(8分)
问题:染色弱,有背景。
原因:可能与孵育温度以及显色时过低有关。
建议:应进行内源性生物素封闭10-15分钟;室温或37℃下进行显色,显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:79
得分:CD20(12分)
问题:染色较弱,对比较差,组织部分飞片,细胞内可见空泡。
原因:可能与一抗孵育温度25℃,时间为60分钟有关,高压修复温度过高易导致细胞内空泡。
建议:一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时。如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。或可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。

单位编号:80
得分:CD3(6分)、CD20(12分)
问题:CD3有非特异性着色,CD3、CD20均存在染色对比较差。
原因:可能一抗孵育温度过短,高压修复时间过长,以及显色温度过长有关。
建议:使用机器染色时,应先进行调试。一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟,如用高压修复,应在喷气后2分钟即中止修复。显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:82
得分:CD20(12分)
问题:染色较弱,对比较差。
原因:从提供的染色方法中,我们推测可能与一抗孵育时间120分钟有关。
建议:一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时。

单位编号:89
得分:CK(12分)
问题:信号太弱。
原因:可能一抗孵育温度过长,使用酶消化进行抗原修复,以及二抗孵育温度22℃过低有关。
建议:一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;可以尝试使用微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。二抗孵育温度提高至37℃,时间为20-30分钟。

单位编号:91
得分:CD20(11分)
问题:染色背景过深。
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。我们推测是否与染色过程中,PBS冲洗不彻底、显色时间过长有关。
建议:染色过程中每一步清洗均应进行三次,显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:97
得分:CD3(12分)
问题:染色背景过深。
原因:一抗孵育过夜、室温会影响抗原的曝露,加深背景。还与显色时使用增强剂,并显色时间8分钟有关。
建议:一抗孵育温度4℃,时间为整夜,或者常温1小时;染色过程中每一步清洗均应进行三次,显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:104
得分:CD3(10分)
问题:染色背景过深,无法正确判断。
原因:从提供的染色方法中没有找到明确的原因。我们推测是否与染色过程中,PBS冲洗不彻底、显色时间过长有关。
建议:染色过程中每一步清洗均应进行三次,显色操作应在显微镜下进行,当阳性信号清晰而背景干净时应及时中止显色。

单位编号:112
得分: Ki-67(5分)
问题: 无信号。
原因:微波炉修复90℃,时间为15-20分钟,抗原修复的温度不充足,修复液为柠檬酸盐pH6.0,会降低Ki-67染色的信号强度;容易影响最终的显色强度。
建议:微波修复最高档(水煮沸)3分钟,再用最低档15-20分钟。并采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:122
得分: CD20(7分)
问题:CD20信号较弱,染色背景深。
原因:可能与二抗孵育温度25℃,时间为12分钟有关。此外染色背景深,可能与冲洗不彻底或显色时间过长有关。
建议:二抗孵育温度提高至37℃,时间为20-30分钟;染色过程中每一步清洗均应进行三次。

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